早在1956年，Adams和Purves就shou次報道了甲狀腺疾病患者血清中，存在與TSH不同的長效甲狀腺刺激因子(LATS) [1]。當時研究發現LATS刺激甲狀腺的機制與血清蛋白的IgG部分相關。1974年，RSR創始人Smith博士與Hall的聯合研究證實了Graves病患者血清中這種因子實質上是特異性靶向TSHR的自身抗體（即TRAb），而TRAb對TSHR的刺激是造成Graves病患者甲狀腺功能亢進的病因[2]。這一研究結果促進了第一代TRAb體外檢測方法的發展，為自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)的輔助診斷和管理提供依據。

TSHR研究的下一個重要里程碑是1989 - 1990年，在四個獨立實驗室中克隆了TSHR基因[3-7]。這為TSHR單克隆抗體的體外制備提供更多基礎。

2003年，Smith博士從一名Graves病患者的外周血淋巴細胞中，分離出促甲狀腺激素受體單克隆自身抗體(稱為M22™)[8]。隨后發現的多種TSHR單克隆自身抗體中，按生理功能又可為兩種阻斷型單抗(5C9和K1-70)和一種刺激型單抗(K1-18)[9]。重組TSHR基因表達技術的發展，配合目前已發現的TSHR單抗，使TSHR富亮氨酸重復結構域(LRD)可與M22和K1-70的Fab片段結合為抗原抗體復合物，以結晶形式得以提取[10,11]。這為后續研究中TSHR LRD與兩種不同效應的單克隆抗體間分子的相互作用提供助益[10,11]。

當前多項研究成果證實，體外環境中的小鼠胚胎干細胞可以通過TSH刺激，定向轉化為功能正常的甲狀腺濾泡細胞。這為長期接受激素替代治療的甲狀腺疾病患者，開辟了功能恢復性治療的新前景[12,13]。我們在近期的研究中還建立了Graves眼病(GO)的小鼠模型[14]，并制備了具有熱穩定性的TSHR LRD制劑，shou次解析了無配體的糖蛋白激素受體結構域的晶體結構（2.83 Å分辨率）[15]。這些重大的科學結果不斷促進對AITD患者診斷、監測以及管理的改進。

TRAb的體外應用實例

如上所述，在Graves病發病機制中，患者血清中的自身抗體對TSHR的刺激起核心作用。因TRAb檢測的重要性，TRAb的檢測方法也歷經了多代的發展：

一代檢測：

液相檢測法，利用血清TRAb可以抑制放射性I-125標記的TSH與TSHR相結合的特性，使用聚乙二醇將抗原抗體復合物沉淀[16]。該檢測法是Graves病診斷的一個里程碑。在早期開展的生物檢測法中，通常以刺激型抗體TSAB或TSH對表達TSHR的活細胞進行刺激，以其產生的第二信使cAMP作為檢測標志物來間接檢測TRAb。該試驗法耗時較久且流程復雜，不適宜大規模檢測。一代液相法作為替代方案改變了這一局面。

二代檢測：

第二代檢測改為固相檢測法，樣品中的TRAb與固定在ELISA微孔或塑料管上的TSHR相結合，隨后與生物素或I-125標記的TSH反應實現檢測[17]。固相檢測法實現了非放射性同位素標記和檢測自動化，與第一代檢測法相比，提高了方法學的靈敏度和特異性。

三代檢測：

在新的第三代檢測中，以M22-生物素替代二代檢測中的TSH-生物素，從而進一步提高了靈敏度和特異性[18]。與二代檢測中TSH與TSHR間的結合相比，M22因其復合物不易解離，在TRAb的競爭抑制法檢測中更具有優勢。這一特性使配體在嚴格的洗滌步驟里保持緊密結合，使其更適合用于自動化檢測系統。第三代TRAb檢測目前在各地的各個平臺上廣泛應用。即使檢測時長控制在半小時內，也能保持良好的靈敏度和特異性[18,19]。

TRAb的濃度通常以IU/L表示，單位定義參考了國家生物標準和控制研究所(NIBSC)提供的世界衛生組織(WHO)標準物質。該類物質通常用于TRAb檢測方法的校準。第一代標準物質(編號90/672)源自一位患者的捐贈。隨著第一代標準物質的耗竭，M22™的開發誕生了第二代國際標準物質(編號08/204)。在NIBSC 08/204標準物質中，每支安瓿的正常人血清中含有1 μg凍干M22 IgG。當前M22™已規模化投產，實現了從實驗室研究向產業化生產的轉變。（RSRTJ解讀：保證了M22的產出及供應問題。）

TSHR的體外應用實例

用TSHR260-JMG55替換對應片段后的全長TSHR，無論是對TSH或M22的刺激信號反饋，還是結合Graves病患者的TSHR自身抗體時，耐熱型TSHR均與野生型TSHR的性能表現接近[15]。這些試驗均證實，耐熱突變不影響TSHR本身的抗原性。

TSHR的體內應用研究

更多關于RSR廠家抗體的介紹：RSR甲狀腺自身免疫系列抗原抗體

參考文獻：Furmaniak, J., et al. "Practical applications of studies on the TSH receptor and TSH receptor autoantibodies." Endocrine 68.2 (2020): 261-264.