【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：谷氨酸脫羧酶抗體（GADAb）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：GADAb ELISA Kit

【包裝規(guī)格】
96 測(cè)試x 1

【預(yù)期用途】
谷氨酸脫羧酶抗體（GADAb）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法），用于定量測(cè)定人血清中谷氨酸脫羧酶抗體（GADAb）的含量。胰島β細(xì)胞抗原的自身抗體是1 型糖尿病（Type 1 Diabetes Mellitus）的重要血清學(xué)標(biāo)志物。可被識(shí)別的胰島β細(xì)胞抗原包括：胰島素、谷氨酸脫羧酶（GAD）、胰島素瘤抗原-2（IA-2）和鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8（ZnT8）等。

【檢測(cè)原理】
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫法定量測(cè)定人血清中谷氨酸脫羧酶抗體（GADAb）水平。主要檢測(cè)原理是依據(jù)GADAb 的Y 型結(jié)構(gòu)在其兩側(cè)臂都具有抗原結(jié)合點(diǎn)，一側(cè)同包被在微孔的固相抗原GAD65 結(jié)合，另一側(cè)同生物素化的液相抗原GAD65 結(jié)合，從而形成橋式結(jié)構(gòu)。隨后加入的過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素與被固定在GADAb 一側(cè)的生物素結(jié)合。洗掉未結(jié)合的酶標(biāo)記物后，添加底物TMB 產(chǎn)生藍(lán)色，添加終止液后反應(yīng)終止顯黃色。使用酶標(biāo)儀在405nm 和450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值（OD
值），計(jì)算樣品濃度。較高的吸光值意味著被檢測(cè)樣本中存在GADAb。檢測(cè)范圍：5-2000U/mL（NIBSC 97/500 濃度單位）。

【主要組成成分】
產(chǎn)品組成：微孔板，生物素標(biāo)記的GAD65 及其復(fù)溶緩沖液，酶標(biāo)記物（SA-POD）及其稀釋液，底物液（TMB），濃縮洗滌液，終止液，校準(zhǔn)品，陽性質(zhì)控品，陰性質(zhì)控品。

檢測(cè)需要但試劑盒未提供的材料
1. 能調(diào)劑25μL 和100μL 的移液器。
2. 能夠定量復(fù)溶或稀釋試劑體積的方法。
3. 純水。
4. 具有405nm 和450nm 檢測(cè)波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀。
5. ELISA 孔板振動(dòng)器（可達(dá)500 次/分鐘的非垂直振動(dòng)器）。
6. ELISA 孔板蓋。

【儲(chǔ)存條件及有效期】
1. 未開封試劑盒置于2-8°C 可保存12 個(gè)月（有效期詳見試劑盒）。
2. 微孔板：包裝開封后但未使用的板條需放回原鋁箔袋，加入干燥劑，密封后放入自封口塑料袋，
在2°C-8°C zui多可穩(wěn)定保存16 周。
3. 生物素標(biāo)記的GAD65：復(fù)溶后的生物素標(biāo)記的GAD65 在2°C-8°C zui多可穩(wěn)定保存3 天。
4. 酶標(biāo)記物：已稀釋的酶標(biāo)記物在2°C-8°C zui多可穩(wěn)定保存16 周。
5. 洗滌液：已稀釋的洗滌液在2°C-8°C 可保存至試劑盒有效期。

【適用儀器】
酶標(biāo)儀（含405nm，450nm 波長(zhǎng)）

【樣本要求】
1. 待分析血清應(yīng)該在經(jīng)過分離后立即檢測(cè)或儲(chǔ)存（建議分裝）于-20°C 或更低溫度。單次檢測(cè)僅需50μL 樣本血清（建議復(fù)孔檢測(cè)，每孔25μL）。
2. 避免重復(fù)凍融或儲(chǔ)存溫度升高。
3. 請(qǐng)勿使用脂血或溶血樣本進(jìn)行檢測(cè)。
4. 請(qǐng)勿使用血漿進(jìn)行檢測(cè)。
5. 需要時(shí)，在室溫下解凍待測(cè)血清樣本并輕輕混合以確保均一性。
6. 檢測(cè)前用離心機(jī)分離血清（建議用微型離心機(jī)轉(zhuǎn)速在10,000~15,000xg，離心5 分鐘），以去除微粒物質(zhì)。如果血清渾濁或包含微粒，請(qǐng)勿省略此離心處理步驟。

【檢驗(yàn)方法】
使用前使所有試劑在室溫（20~25°C）下擱置至少30 分鐘。建議在步驟4、7、10、11 中使用Eppendorf連續(xù)加樣器。
1.加入25μL 患者血清、校準(zhǔn)品、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品到各自孔中，一式兩份。預(yù)留一個(gè)空白孔。（見步驟12）。
2. 蓋上孔板蓋，室溫條件下，在ELISA 孔板振動(dòng)器（500 次/分）上振蕩1 小時(shí)。
3.用ELISA 孔板洗滌器抽出試劑并用稀釋后的濃縮洗滌液清洗孔板3 次。如手工洗板，迅速倒扣孔板于適當(dāng)托盤上以丟棄孔內(nèi)液體。手工洗板三次并在清潔干燥的吸水表面上拍干孔板。
4.用移液器加入100μL 復(fù)溶的生物素化的GAD65 于每個(gè)孔內(nèi)（空白孔除外）。添加過程中避免液體飛濺到孔外。
5. 蓋上孔板蓋，室溫條件下，在ELISA 孔板振動(dòng)器（500 次/分）上振蕩1 小時(shí)。
6. 重復(fù)清洗步驟3。
7. 用移液器加入100μL 稀釋的酶標(biāo)記物于每個(gè)孔中（空白孔除外）。
8. 蓋上孔板蓋，室溫條件下，在ELISA 孔板振動(dòng)器（500 次/分）上振蕩20 分鐘。
9. 重復(fù)清洗步驟3。如手工清洗，在拍干孔板前，額外用純水清洗一次，以去除泡沫。
10 用移液器加入100μL 底物液于每個(gè)孔內(nèi)（包括空白孔），在室溫條件下避光靜止孵育20 分鐘。
11 用移液器加入100μL 終止液于每個(gè)孔內(nèi)（包括空白孔），蓋上孔板蓋，振動(dòng)大約5 秒鐘。確保每個(gè)孔的反應(yīng)同時(shí)終止。
12 在反應(yīng)終止后五分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀分別在450nm 和405nm 波長(zhǎng)下讀取每個(gè)孔的吸光值，并扣除僅包含100μL 底物液和100μL 終止液的空白孔吸光值。

【臨界值】
臨界值U/mL
陰性<5U/mL
陽性≥5U/mL

【檢測(cè)結(jié)果分析】
以校準(zhǔn)品濃度為X 軸（對(duì)數(shù)模式）和以校準(zhǔn)品的吸光度為Y 軸（線性模式）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。RSR
繪成對(duì)數(shù)/線性Spline 曲線，平滑系數(shù)為0。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可以讀出樣本血清的GADAb 濃度。亦可
使用其他數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。可賦予陰性質(zhì)控品濃度為0.5U/mL 來輔助電腦分析檢測(cè)結(jié)果。由于大多數(shù)
測(cè)試血清的濃度會(huì)低于250U/mL，所以可以省略2000U/mL 校準(zhǔn)品。抗體濃度高的樣本可用GADAb
陰性血清或試劑盒陰性質(zhì)控品或RSR 額外提供的稀釋劑進(jìn)行稀釋。例如，20μL 樣本加上180μL
稀釋劑得到10 倍稀釋液。其他稀釋倍數(shù)（例如100 倍）可以從10 倍稀釋液制備或視情況而定。參
照試劑盒的校準(zhǔn)品（按照NIBSC 97/550 標(biāo)準(zhǔn)），某些血清的稀釋不會(huì)呈線性變化。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
臨床特異性和靈敏度
在DASP2005 研究中，本試劑盒特異性為98%（n=100），靈敏度為92%（n=50）。
zui低檢測(cè)限
檢測(cè)試劑盒陰性質(zhì)控品20 次，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。在2 倍標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)檢測(cè)下限是0.57U/mL。

【注意事項(xiàng)】
1. 本品僅供體外診斷使用，操作應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。
2. 所有試驗(yàn)需在20~25°C 下進(jìn)行，應(yīng)避免由日光照射機(jī)器或周圍儀器發(fā)熱引起的高溫。
3. 使用新的吸頭用于陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本的操作。
4. 不能混用其他制造商的產(chǎn)品。
5. 取出所需數(shù)量的微孔條，包裝開封后但未使用的板條需放回原鋁箔袋，加入干燥劑，密封后放
入自封口塑料袋，保存于2~8°C。
6. 將酶反應(yīng)物底物加入微孔后，酶標(biāo)板需立即放置于黑暗處。
7. 操作前應(yīng)仔細(xì)閱讀本說明書并嚴(yán)格按照其指示操作，否則可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。
8. 廢棄樣本和廢液的處理應(yīng)遵照相應(yīng)的生物安全和有毒有害物質(zhì)管理規(guī)定。

【生產(chǎn)企業(yè)】
制造商名稱：RSR Limited
生產(chǎn)地址及注冊(cè)地址：Avenue Park, Pentwyn, Cardiff, CF23 8HE, United Kingdom
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售后服務(wù)機(jī)構(gòu)名稱：天津阿斯?fàn)柹锟萍加邢薰?/span>
售后服務(wù)機(jī)構(gòu)地址：天津?yàn)I海高新區(qū)華苑產(chǎn)業(yè)區(qū)海泰發(fā)展六道6號(hào)海泰綠色產(chǎn)業(yè)基地J座312 室
售后服務(wù)機(jī)構(gòu)：+86 22 8372 6755
【醫(yī)療器械注冊(cè)證書編號(hào)】國(guó)械注進(jìn)20152401578